Lip2000轉(zhuǎn)染試劑 BL623A 現(xiàn)貨

Lip2000Transfection Reagent 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 BL623A Lip2000Transfection Reagent 0.5ml BL623B Lip2000Transfection Reagent 1ml 產(chǎn)品簡介： Lip2000 是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA 和 RNA)轉(zhuǎn)染入真 核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性；對(duì)多種類型的細(xì)胞都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響 轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。 適用范圍： 貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（哺乳動(dòng)物細(xì)胞系）的轉(zhuǎn)染。 質(zhì)粒 DNA 的轉(zhuǎn)染：對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，DNA(µg)與 Lip2000(µl)的比例為 1:2~1:3。轉(zhuǎn) 染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率 和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。 1、以 24 孔板為例 貼壁細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用 500µl 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 0.5-2×10 5 細(xì)胞，使之第 二天能達(dá)到 70-90%匯合。 懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備 DNA-Lip2000 復(fù)合物之前，用 500µl 不含 抗生素的培養(yǎng)基接種 4-8×10 5 細(xì)胞即可。 2、對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作 （1）在eppendorf管里分別加入50µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA， 輕柔混勻，制成 DNA 稀釋液。 （2）在另一個(gè) eppendorf 管里分別加入 50µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和 2.0µlLip2000（注意用前先混勻），輕柔混勻，制 成 Lip2000 稀釋液，室溫靜置 5 分鐘。 （3）將 DNA 稀釋液和 Lip2000 稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置 20 分鐘， 形成 DNA-Lip2000 復(fù)合物。DNA-Lip2000 復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在 6 小時(shí)。 3、將 DNA-Lip2000 復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合 物分散均勻。 4、在 37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4-6 小時(shí)后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng) 18-48 小時(shí)。 5、如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后將細(xì)胞按照 1:10 或更高的比例接種到

新鮮培養(yǎng)基中，第二天加 入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。 質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染的優(yōu)化：為達(dá)到zui高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì) DNA 和 Lip2000 的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在 1:0.5~1:5 的范圍內(nèi)優(yōu)化 DNA (µg)和 Lip2000 (µl) 的比例。 不同細(xì)胞培養(yǎng)板中轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)基、核酸及 Lip2000 用量: 細(xì)胞培 養(yǎng)板 每孔面積 培養(yǎng)基用量 DNA 轉(zhuǎn)染 siRNA 鋪板培養(yǎng) 基用量 稀釋培養(yǎng) 基用量 96-well 0.3 cm2 100 ul 2 × 25 µl 0.2µg 0.5µl 5 pmol 0.25µl 24-well 2 cm2 500 ul 2 × 50µl 0.8µg 2.0µl 20 pmol 1.0µl 12-well 4 cm2 1 ml 2 × 100µl 1.6µg 4.0µl 40 pmol 2.0µl 6-well 10 cm2 2 ml 2 × 250µl 4.0µg 10µl 100 pmol 5µl 60-mm 20 cm2 5 ml 2 × 0.5 ml 8.0µg 20µl 200 pmol 10µl 10-cm 60 cm2 15 ml 2 × 1.5 ml 24µg 60µl 600 pmol 30µl 保存條件： 2-4℃保存一年（避免冷凍）。

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